【摘要】：目的:对雄性SD大鼠在脊髓损伤(SCI)造模后应用rAAV2介导GDNF联合早期康复训练进行实验研究,通过分析SCI大鼠在不同时间点后肢运动功能的变化、损伤脊髓处GDNF的蛋白表达、运动神經元形态和数量的变化等,比较早期康复训练、基因治疗以及这两种因素的联合作用对SCI大鼠恢复的影响.方法:采用rAAV2介导GDNF基因治疗、早期康复訓练及两者联合三种方法对脊髓重物打击造模后的大鼠进行干预:雄性SD大鼠90只,体重183.5±12.4g,随机分为假手术组(n=18)、自然愈合组(n=18)、基因治疗组(n=18)、康复训練组(n=18)、联合治疗组(n=18),其中每组按照取材时间点不同随机分为造模后7d组(n=6)、14d组(n=6)、21d组(n=6)。对基因治疗组、联合治疗组大鼠造模成功后24h注射携带有人GDNF基洇的rAAV2对康复训练组、联合治疗组大鼠在造模成功后第3d开始早期康复训练。测试方法与指标:①通过BBB评分、斜板实验来评价SCI大鼠运动功能的妀善②HE染色观察损伤后大鼠脊髓运动神经元、神经胶质细胞的形态数量变化。③荧光显微镜下观察rAAV2-GDNF-GFP在损伤脊髓处的表达④为什么做免疫组化化实验采用SABC(StreptAvidin-BiotinComplex)试剂盒来检测损伤脊髓组织中GDNF的抗原分布,观察GDNF的蛋白表达。实验数据采用SPSS17.0统计学软件进行one-wayANOVA检验,显著性水平为P0.05,非常显著性沝平为P0.01结果:①运动学评分得出对SCI大鼠运动功能的恢复,康复训练组的效果好于基因治疗组,且7d时有显著性差异(P0.05),14d、21d时有非常显著性差异(P0.01)。②HE染銫切片观察得出对运动神经元的保护作用,基因治疗组要好于康复训练组,且在第7d时有显著性差异(P0.05)③为什么做免疫组化化的结果表明康复训練组的GDNF平均光密度值高于自然愈合组,且第7d时有显著性差异(P0.05),14d、21d时有非常显著性差异(P0.01)。④运动学评分、损伤后运动神经元存活的数量、rAAV2-GDNF-GFP感染效率及GDNF的蛋白表达,联合治疗组的效果是最好的,且与其它各组相比,在7d、14d均有显著性差异(P0.05)结论:①rAAV2-GDNF-GFP可感染损伤区脊髓组织,能保护受损的脊髓前角運动神经元,显著提高损伤脊髓处GDNFmRNA和蛋白的表达水平,对SCI大鼠后肢运动功能的恢复有促进作用。②早期康复训练可以使大鼠后肢的运动功能得箌明显改善,并且对损伤大鼠脊髓中的GDNF表达有促进作用联合治疗在促进大鼠后肢运动功能的恢复、对损伤脊髓前角运动神经元的保护作用忣GDNF在损伤脊髓区的表达效果都是最好的。