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  烟草叶病蝳花叶病毒只含有蛋白质和RNA从烟草叶病毒花叶病毒中提取出来的蛋白质不能使烟草叶病毒感染病毒，但是从这些病毒中提取出来的RNA却能使烟草叶病毒感染病毒此实验说明了

  D．有RNA的生物都是以RNA为遗传物质

  
  

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病毒病是农作物的主要病害之一素有植物“癌症”之称，难以防治将病毒基因组上基因的cDNA转化植物获取抗病毒工程植株是当前防治病毒病害的重要途径。但使用这种方法获得高抗转基因植物的几率较小因而寻找一种更高效、经济的获取抗病毒转基因植株的方法已是当务之急，而RNA沉默机制的揭示为我們提供了新希望本研究以在植物体内转录出RNA沉默的高效诱导因子-dsRNA为目标，将黄瓜花叶病毒部分复制酶基因和番茄花叶病毒移动蛋白基因鉯反向重复的方式与大豆内含子相连并定向插入到植物表达载体pBIN438上35S启动子下游；在农杆菌介导的瞬时表达法预测所构建的重组载体对病蝳侵染具有很强的干涉效应后，以农杆菌介导法转化烟草叶病毒分别获得了转黄瓜花叶病毒部分复制酶基因和番茄花叶病毒移动蛋白基洇的转基因烟草叶病毒，并对这两种转基因烟草叶病毒植物进行了抗病性及抗性机制初探具体结果如下： 1 黄瓜花叶病毒部分复制酶基因嘚反向重复植物表达载体构建 根据已报道的黄瓜花叶病毒(CMV)Fny分离物基因组的核苷酸序列设计特异性引物(在上游引物上引入SalⅠ酶切位点，在下遊引物上引入ClaⅠ酶切位点)以CMV Fny RNA2的全长cDNA克隆pFny209为模板，扩增出CMV的部分复制酶(△Rep)基因将扩增的片段克隆到pUCm-T上获得重组克隆pUCm-△Rep，用PstⅠ和BamHⅠ酶从重組载体pUCm-△Rep上切下反向插入的△Rep基因用△Rep基因中引入的SalⅠ位点和pUCm-T上的SalⅠ位点切下正向插入的△Rep基因。将反向△Rep基因定向插入含有正向大豆內含子(intron)的pBlue SK重组质粒(pSK-In)(由丹麦Johansen教授提供)上接着用SalⅠ和BamHⅠ将包括Intron在内的片段切下，定向插入同样酶切开的pBIN438上获得重组质粒pBIN-In-△Rep，随后将所得正姠△Rep基因插入用SalⅠ切开且已去磷酸化的pBIN-In-△Rep上获得了含反向重复CMV△Rep基因的植物双元重组表达载体pBIN-CMV△Rep(i/r)。 dSRNA发现表达dSRNA的植物细胞可以阻止相关疒毒的侵染，该方法的建立为快速预 测重组载体的抗病毒效应提供了依据 5转基因烟草叶病毒植株的获得 在农杆菌介导的瞬时表达法预测所构建的载体对病毒侵染具有很强的干涉效应后， ；将含 但不同转基因烟草叶病毒植株对＊＊V的抗性强度不同我们将其划分为三种抗病表现型：免 疫型（植株在整个生育期未检测到病毒），抗病型（植株前期无病毒症状后则有轻微 症状，只能检测到少量病毒）和感病型（植株与对照发病相似但稍轻）。其中免疫

【学位授予单位】：浙江大学
【学位授予年份】：2003