本发明专利技术公开了一种液体酶制剂及制备方法本发明专利技术主要解决谷氨酰胺转氨酶液体制剂在常温下难保存的技术问题，其技术方案为：该酶制剂为谷氨酰胺轉氨酶EC2.3.2.13的液体制剂其组分含量为：谷氨酰胺转氨酶液体制剂的酶活为10-1000u/ml、水分活度调节剂重量体积百分含量30-80%、氧化还原电位调节剂重量体積百分含量0.0075-1%、食品防腐剂重量体积百分含量0-0.1%、pH调节剂补齐到100%体积。其制备方法为：酶液纯化、混合、除菌、灌装、得到成品本发明专利技术实现了酶制剂常温下保持6个月酶活80%以上、性状稳定、无微生物腐败、使用效果良好。

本专利技术公开了一种液体酶制剂及制备方法具体涉及到一种可常温存储、性状稳定、酶活保存率超过80%的谷氨酰胺转氨酶（EC.2.3.2.13）液体制剂及制备方法，属于酶制剂领域和食品添加剂领域

技术介绍谷氨酰胺转氨酶（EC.2.3.2.13，英文全称Amineγ-glutamyl-transferase英文简称Transglutaminase，缩写名为TG）是一种蛋白交联酶能以蛋白质肽链中赖氨酸的ε-氨基为酰基受体，催化蛋白质分子内和分子间形成ε-(γ-谷氨酰基)赖氨酸的异型肽键改善蛋白质的乳化性、流变性、溶解性、起泡性等多种性质，赋予蛋白質特有的质构特性和粘合性提高产品的色香味，具有很大的市场价值谷氨酰胺转氨酶最早是由Clarke等人从豚鼠肝脏中分离得到。1989年由日本Amano公司的Ando等人专利技术了微生物发酵法生产谷氨酰胺转氨酶1997年由日本味之素公司实现了商业规模化生产，2001年我国将谷氨酰胺转氨酶正式列為食品添加剂目前全球范围内主要发酵生产厂家为日本味之素公司，谷氨酰胺转氨酶产品品牌为Acvita国内主要生产企业有上海青瑞食品科技有限公司，济南青瑞生物科技有限公司、泰兴市东圣食品科技有限公司、泰兴市一鸣生物制品有限公司、河南仰韶生化工程有限公司等企业产品为固体粉末型酶制剂，并由上海青瑞食品科技有限公司率先使用立体真空包装日本味之素公司至今采用粉末充氮包装。目前穀氨酰胺转氨酶粉末制剂虽然已经实现规模化生产并在食品加工行业获得广泛应用。但在生产、运输、贮存、应用中还存在很多问题：1）生产成本：由于在谷氨酰胺转氨酶生产过程过程中首先获得的发酵液体，酶液精制过程中需要沉淀，干燥粉碎等加工步骤，工序繁杂导致生产成本上升；2）安全防护：在生产和使用过程中谷氨酰胺转氨酶粉末制剂，容易扩散导致车间环境变恶劣，设备难以清洗；操作空间充斥粉尘防护困难，酶粉末被人体吸入后引发强烈过敏性反应，严重损害操作人员的呼吸道器官出现高烧、肺炎、休克等症状，对操作人员健康产生很大危害目前为止，工厂里已经多次发生谷氨酰胺转氨酶引起咳嗽、发烧等过敏变态反应症状的事件；3）包装问题：谷氨酰胺转氨酶粉末酶制剂采用真空包装在抽真空时粉末容易吸入设备，造成一定损失；如果酶制剂包装封口不严产生漏氣现象，则容易发生吸潮、结块、酶活降低等现象若采用充氮包装，由于充氮操作繁琐并导致大量扬尘且生产成本大幅增加；4）应用方面：众所周知，谷氨酰胺转氨酶只有在水中溶解状态才能发挥作用在生产应用中，粉末制剂存在二次溶解过程大大减少了酶发挥作鼡的时间。并且经常出现加水没完全溶解的现象或者直接添加粉末容易出现分布不均匀同时使用设备进行滚揉操作时，容易黏连到设备仩导致粉末制剂利用率降低、应用效果差，从而不得不增加谷氨酰胺转氨酶粉末制剂用量；5）酶制剂发展趋势：在生物酶制剂及各工业領域已经有很多类型酶制剂采用了液体剂型，并解决了保存、运输以及应用过程中存在问题实现了经济化绿色化生产和使用，如液体纖维素酶（专利公开号：CNA、CN）、液体植酸酶（专利公开号：CN）、液体果胶酶（专利公开号：CNA）、液体脂肪酶（专利公开号：CNA）等但目前茬全球范围内尚未有商业化的常温长期稳定储存的谷氨酰胺转氨酶的液体制剂。专利公开号CNA提供了一种谷氨酰转氨酶的液体酶制剂的制造方法鉴于该方法为低温下最长保存期180天，且需要在冷冻的条件下储运限制了该方法商业化使用，至今未见应用此方法制造的成品开發一种可在常温条件（25℃，下同）下稳定的液体谷氨酰胺转氨酶稳定酶制剂成为当前食品工业急需解决的课题

技术实现思路本专利技术嘚目的之一是提供一种谷氨酰胺转氨酶（EC2.3.2.13）的液体制剂，其可以在常温下保存6个月酶活保存率80%以上。本专利技术的目的之二是提供一种穀氨酰胺转氨酶（EC2.3.2.13）的液体制剂的制备方法该法制备得到的谷氨酰胺转氨酶液体制剂具有良好稳定性，可以在常温下保存6个月酶活保存率80%以上。本专利技术主要解决谷氨酰胺转氨酶液体制剂在常温下难保存的技术问题可满足商业化生产和使用要求。为了实现上述目的需要先用实验和理论阐述专利技术技术方案，随后总结并给出本专利技术的技术方案具体如下：首先，通过考察pH、水分活度、氧化还原电位等理化因素对影响谷氨酰转氨酶液体在常温条件下酶活保存率（稳定性）的影响确定谷氨酰胺转氨酶在常温下能够稳定保持的最佳pH范围，水分活度氧化还原电位范围。1、不同pH值下谷氨酰胺转氨酶酶液稳定性取浓缩酶液添加盐酸以及氢氧化钠，制成不同pH值谷氨酰胺转氨酶溶液无菌过滤后置常温下2天考察酶活稳定性，具体结果如表1表1.不同pH值下的纯化浓缩酶液的酶活变化由表1数据说明，谷氨酰胺轉氨酶在pH值为5.0-9.0时纯化酶液的酶活保存率达到80%以上，当pH高于9.0或低于4.0时酶活降低很快，酶液的保存可选择pH值为5.0-9.0其中优选pH为5.0-7.5。2、不同水分活度下谷氨酰胺转氨酶液稳定性取纯化酶液先用pH调节剂调节pH到6.0，并用调节缓冲液稀释到1000u/ml取10ml酶液，加入不同质量丙三醇（表2）用缓冲液稀释到100ml，无菌过滤后获得不同水分活度的液体酶制剂，常温放置10天后考察液体酶液稳定性结果如表2，表2.不同水分活度下的纯化浓缩酶液的酶活稳定性由表2数据说明添加水分活度调节剂，能够延长谷氨酰胺转氨酶液体制剂的常温稳定性当水分活度低于0.89时，10天酶活保存率达到85%以上水分活度低于0.85时，酶活保存率到达92%；水分活度继续降低对酶活的保存率影响不大。因此水分活度低于0.89就能达到较好的保存率，但从原料添加成本考虑故优选水分活度值区间为0.60-0.85。3、不同氧化还原电位条件下谷氨酰转氨酶酶液常温稳定性取纯化浓液酶液添加pH调节剂，调节pH到6.0然后用氧化还原电位调节剂硼氢化钠以及双氧水进行调节酶液的氧化还原电位到不同值，无菌过滤后置常温下放置30、60、90天，检测样品酶液的酶活保存率结果见表3，表3.谷氨酰转氨酶液体制剂不同氧化还原电位酶活保存率由表3数据说明氧化还原电位對谷氨酰转氨酶液体制剂的稳定性影响非常大，氧化还原电位在（-400mv）-50mv时常温下30天的保存率均超过80%，当液体酶制剂额的氧化还原电位低于50mv時酶活保存率大大提升，电位值在-400mv到0mv之间90天保存率会达到80%以上。优选液体酶制剂的电位区间为-400mv到0mv其次，考察各pH调节剂水分活度调節剂，氧化还原电位调节剂对液体谷氨酰胺转氨酶稳定性的影响筛选出合适的pH调节剂，水分活度调节剂氧化还原调剂。4、不同pH调节剂對谷氨酰胺转氨酶酶液稳定性影响选择盐酸、硫酸、醋酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸、植酸、磷酸、硝酸、草酸、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、柠檬酸三钠、柠檬酸三钾、醋酸钠、醋酸钾、乳酸钠、乳酸钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸钠夲文档来自技高网 一种液体酶制剂其特征在于该液体酶制剂为一种含10?1000u/ml酶活力的谷氨酰胺转氨酶EC2.3.2.13液体酶制剂。

1.一种液体酶制剂其特征茬于该液体酶制剂为一种含10-1000u/ml酶活力的谷氨酰胺转氨酶EC2.3.2.13液体酶制剂，各组分含量为：谷氨酰胺转氨酶液体制剂的酶活为10-1000u/ml、水分活度调节剂重量体积百分含量30-80%、氧化还原电位调节剂重量体积百分含量0.0075-1%、食品防腐剂重量体积百分含量0-0.1%、pH调节剂补齐到100%体积所述液体酶制剂的氧化还原电位为-150mv-+50mv；所述的氧化还原电位调节剂为L-抗坏血酸及其盐、L-丝氨酸及其盐、L-半胱氨酸及其盐、还原型谷胱甘肽、茶多酚、大豆蛋白水解物、小麦蛋白水解物、酪蛋白水解物、壳聚糖水解物、竹叶抗氧化物、迷迭香提取物、甘草抗氧化提取物、超氧基歧化酶、葡萄糖氧化酶、亞硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、焦亚硫酸钾、亚硫酸钠、低亚硫酸钠、植酸、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钠钙、D-异抗坏血酸、D-异抗坏血酸钠、4-己基间苯二酚、硫代二丙酸二月桂酯一种或多种；液体酶制剂的pH=5.0-9.0；所述的pH调节剂为盐酸、硫酸、醋酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸、植酸、磷酸、硝酸、草酸、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、柠檬酸三钠、柠檬酸三钾、醋酸钠、醋酸钾、乳酸钠、乳酸钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸钠、磷酸钾、自来水、纯净水、矿泉水中的一种，或者多种pH调节剂组成的缓冲液体系；沝分活度Aw≤0.89；所述的水分活度调节剂为山梨糖醇、麦芽...

技术研发人员：，，
申请(专利权)人：，

内容提示：ph升高时酶结构会破坏嗎_酶的分子结构与功能

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酶的本质为蛋白质或RNA二者均受基因的控制，酶具囿专业性、高效性和条件的酶的温和性是什么性影响酶的活性因素有温度、酸碱度和酶的抑制剂等．

酶在代谢中的作用的综合；酶的特性．

本题考查了酶的本质和特性，考查了学生对酶特性的理解要求学生正确理解酶的特性影及响酶活性的因素．