为什么要用max作为测定波长分光光度法测定一般选择最大波长为测量波长？

点击联系发帖人 时间：2022-10-10 08:23

为什么要用max作为测定波长

实验四邻菲罗啉分光光度法测定水样中的铁

1、掌握邻菲罗啉分光光度法测定微量铁的原理和方法；

2、学会标准曲线的绘制方法及其使用。

亚铁离子（Fe）在pH=3~9时与邻菲罗啉生成稳定的橙红色络合物，应用此反应可用比色法测定铁。橙红色络合物的吸光度与浓度的关系符合朗伯-比耳定律。若用还原剂（如盐酸羟胺）把高铁离子还原为亚铁离子，则此法还可测定水中的高价铁和总铁的含量。

721型分光光度计、1cm比色皿、具赛比色管（50ml）、移液管、吸量管、容量瓶等。

2、铁标准使用液（20?g/mL）：准确移取铁贮备液20.00ml于100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液中Fe的质量浓度为 20.0?g/mL。（学生配制）

3、0.5%邻菲罗啉水溶液：配制时加数滴盐酸能助溶液或先用少许酒精溶解，再用水稀释至所需体积。（临用时配制）

4、10%盐酸羟胺水溶液：

5、醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH=4.6）：称取40克纯醋酸铵加到50毫升冰醋酸中，加水溶解后稀释至100毫升。

（2）依次分别加入10%盐酸羟胺溶液1ml，混匀，加入5ml醋酸－醋酸铵缓冲溶液，摇匀，加入0.5%邻菲罗啉溶液2ml，摇匀，

实验二十四邻菲罗啉分光光度法测定铁

1.1 进一步了解朗伯-比尔定律的应用。

1.2 学会邻菲罗啉分光光度法测定铁的方法和正确绘制邻菲罗啉-铁的标准曲线。

1.3 了解分光光度计的构造及使用。

邻菲罗啉（又称邻二氮杂菲）是测定微量铁的一种较好试剂，其结构如下：

在pH=1.5～9.5的条件下，Fe与邻菲罗啉生成很稳定的橙红色的络合物，反应式如下：

在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe还原为Fe：

测定时，控制溶液酸度在pH=2～9较适宜，酸度过高，反应速度慢，酸度太低，则Fe2+水解，影响显色。

Bi3+、Ca2+、Hg2+、Ag+、Zn2+离子与显色剂生成沉淀，Cu2+、Co2+、Ni2+离子则形成有色络合物，因此当这些离子共存时应注意它们的干扰作用。

3.1 可见分光光度计。

3.2 铁盐标准溶液的配制：

溶于（1+1）硫酸50mL，完全溶解后移入1000mL容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀。。

B液（0.01g·L-1）：用25mL移液管，准确移取A液25.00mL，置于100mL的容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀。

冰乙酸，加水溶解后，稀释至500mL。

3.4 ?=1%的盐酸羟胺水溶液，因不稳定，需临用时配制。

3.5 ?=0.1%的邻菲罗啉水溶液：先用少许乙醇溶解后，用水稀释，新近配制。

3.6 50mL容量瓶7个（先编好1、2、3、4、5、6、7号），10mL移液管（有刻度）1支，

邻菲罗啉分光光度法测定铁

中文别名：邻菲罗啉又叫邻二氮菲

主要用途：邻菲罗啉与亚铁离子在PH2~9的条件下生成桔红色络合物，然后用分光光度法测定铁含量。物理化学性质：一水合物为白色结晶性粉末。熔点93-94℃，无水物熔点为117℃，溶于300份水，70份苯，溶于醇和丙酮。

能与多种过渡金属形成配合物，由于形成的配合物为螯合物，所以较为稳定。与铜形成的配合物及其衍生物因为对DNA有一定的切割活性，可以用作非氧化性核酸切割酶，进而有一定的抗癌活性。

4-1-1-1× 10L·mol·cm，铁含量在0.1～6μg·mL范围内遵守比尔定律。其吸收曲线如图所示。显色前需用盐

3+2+酸羟胺或抗坏血酸将Fe全部还原为Fe，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。有

测定时，控制溶液酸度在pH=2～9较适宜，酸度过高，反应速度慢，酸度太低，则Fe水解，影响显色。 Bi、Ca、Hg、Ag、Zn离子与显色剂生成沉淀，Cu、Co、Ni离子则形成有色络合物，因此当这些离子共存时应注意它们的干扰作用。

邻菲罗啉分光光度法测定铁

1.1 进一步了解朗伯-比尔定律的应用。

1.2 学会邻菲罗啉分光光度法测定铁的方法和正确绘制邻菲罗啉-铁的标准曲线。

1.3 了解分光光度计的构造及使用。

邻菲罗啉（又称邻二氮杂菲）是测定微量铁的一种较好试剂，其结构如下：

在pH=1.5～9.5的条件下，Fe2+与邻菲罗啉生成很稳定的橙红色的络合物，反应式如下：

在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3+还原为Fe2+：

测定时，控制溶液酸度在pH=2～9较适宜，酸度过高，反应速度慢，酸度太低，则Fe2+水解，影响显色。

Bi3+、Ca2+、Hg2+、Ag+、Zn2+离子与显色剂生成沉淀，Cu2+、Co2+、Ni2+离子则形成有色络合物，因此当这些离子共存时应注意它们的干扰作用。

3.1 可见分光光度计。

3.2 铁盐标准溶液的配制：

B液（0.01g·L-1）：用25mL移液管，准确移取A液25.00mL，置于250mL的容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，备用。

3.3 乙酸-乙酸钠（HAc-NaAc）缓冲溶液（pH=4.6）：称取135g分析纯乙酸钠，加入120mL冰乙酸，加水溶解后，稀释至500mL。

3.4 ?=1%的盐酸羟胺水溶液，因不稳定，需临用时配制。

3.5 ?=0.1%的邻菲罗啉水溶液：先用少许乙醇溶解后，用水稀释，新近配制。

3.6 50mL容量瓶7个（先编好1、2、3、4、5、6、7号），10mL移液管（有刻度）1支，5mL移液管（有刻度）4支，5mL量筒1个，500mL烧杯1个，洗瓶1个，洗耳球1个，小滤纸，镜头纸。

铁的测定（邻菲罗啉分光光度法）

上海欣茂723C可见分光光度计，波长510nm，配有100mm比色皿。

先将高铁用盐酸羟胺还原成亚铁。在pH为4~5的条件下，亚铁与邻菲罗啉生成浅红色络合物。

4.1 10%盐酸羟胺溶液（重/容）：称取10g盐酸羟胺，加入少量高纯水，待溶解后用高纯水稀释至100ml，摇匀并贮于棕色瓶中，塞紧瓶塞。

4.2 0.1%邻菲罗啉溶液（重/容）：称取1g邻菲罗啉（C12H8N2·H2O）溶于100ml无水乙醇中，用高纯水稀释至1L，摇匀，贮于棕色瓶中，并在暗处保存。

4.3 乙酸-乙酸铵缓冲液：称取100g乙酸铵溶于100ml高纯水中，加200ml冰乙酸，用高纯水稀释至1L，摇匀后贮存。

4.4 铁工作溶液（1ml含1μgFe）：取铁标准溶液（1ml含100μg）10.00ml，注入1L容量瓶中，用高纯水稀释至刻度（使用时配制）。

4.5 浓盐酸（优级纯）。

4.8 刚果红试纸：试纸切成约4mm×4mm的小方块。

5.1 工作曲线的绘制：

5.1.1 按表1量取一定量亚铁标准溶液（1mL含1?g Fe2+），分别注入一组50mL容量瓶中，加水稀释至30mL左右。

杯中，各加入1ml浓盐酸，加热浓缩至体积略小于25ml。冷却至30℃左右，加入1ml盐酸羟胺溶液，摇匀，静置5min，加入5ml0.1%邻菲罗啉溶液，摇匀后每个锥形瓶中各加入一小块刚果红试纸，慢慢滴加氨水调节PH至3.8～4.1，使刚果红试纸恰由蓝色转变为紫色，然后依次加入5ml乙酸-乙酸铵缓冲液。摇匀后移入原50ml容量瓶中，用高纯水稀释至刻度。在723C型分光光度计上，用波长510nm，100mm长比色皿，以高纯水为参比测定吸光度。

了解朗伯-比尔定律的应用，掌握邻二氮菲法测定铁的原理；了解分光光度计的构造；掌握分光光度计的正确使用方法；学会吸收曲线的绘制和样品的测定原理。

邻菲啰啉是测定微量铁的较好试剂。在pH＝2～9 的条件下，邻菲啰啉与Fe2+生成稳定的橙红色配合物，其反应式如下：

Fe3+能与领二氮菲生成淡蓝色配合物（不稳定），故显色前加入还原剂：盐酸羟胺使其还原为Fe2+。。

紫外可见分光光度计、铁标准溶液：含铁0.01mg/mL、0.1%邻菲罗啉水溶液、10%盐酸羟胺水溶液、1mol/lNaAc缓冲溶液（pH4.6）。

1．吸收曲线的绘制和测量波长的选择

吸取0.0mL和6.0mL 铁标准溶液分别注入两个50 mL容量瓶中，依次加入5mlNaAc溶液，

2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。用1cm比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm之间，每隔0.5nm测吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。

分别吸取铁的标准溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml于6只50ml容量瓶中，依次分别加入5ml醋酸－醋酸钠缓冲溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，在其最大吸收波长下，用1cm比色皿，以试剂溶液为空白，测定各溶液的吸光度，以铁含量(mg/50ml)为横坐标，溶液相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

五、实验记录及数据处理

分光光度计，吸收池，酸度计

分光光度计的光学原理：朗伯-比尔定律

即在一定条件下，物质的吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比

原理:在酸度为ph3~9的溶液中，fe2+可与邻菲罗啉发生反应生成橘红色配合物。该配合物十分稳定，在一定浓度范围内，吸光度与亚铁离子浓度呈直线关系，符合比尔定律。Fe3+也可与邻菲罗啉反应生成淡蓝色配合物，若样品中含有三价铁离子，可与先用盐酸羟胺将其还原为fe2+，然后进行测定，此时测定的是总铁含量。

由于显色反应通常会受到多种因素的影响,如显色剂加入量的合适范围,显色时间,溶液的酸度,反应温度等.因此,为了获得最佳的测定方案,必须对影响显色反应的各种因素进行试验.

酸度过高，反应速度慢，酸度太低fe2+水解，影响显色。

波长由绘制的吸收曲线可知，在波长为510nm处有最大的吸收度，因此后面的实验所采用的波长均为510nm

取样少，分析快，简便，准确和灵敏度高的优点

湖南大学实验报告

课程实验者名称页数（）专业年级、班同组者姓名级别姓名实验日期年月日

1．了解朗伯-比尔定律的应用，掌握邻二氮菲法测定铁的原理；

2．了解TU1901分光光度计的构造；

3．掌握TU1901分光光度计的正确使用；

4．学会吸收曲线的绘制和样品的测定原理。

邻菲啰啉是测定微量铁的较好试剂。在pH＝2～9 的条件下，邻菲啰啉与Fe2+生成稳定的橙红色配合物，其lgK形＝21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104，其反应式如下：

显色前首先用盐酸羟胺把Fe3+还原为Fe2+。

3、0.1%邻菲罗啉水溶液；

4、1%盐酸羟胺水溶液；

5、醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH4.6）：

湖南大学实验报告

课程实验者名称页数（）专业年级、班同组者姓名级别姓名实验日期年月日

}

1.2天文学概述（一）

1.3天文学概述（二）

1、【单选题】全天星空按照北半球春分、夏至、秋分以及冬至太阳在天球上的投影位置可依次划分为（）

26、【单选题】全天星空按照北半球春分、夏至、秋分以及冬至太阳在天球上的投影位置可依次划分为（）

8、【多选题】下列关于天体视运动说法正确的是（）
D、每天同一时刻月亮的位置逐日东移是天体周年视运动的表现

9、【多选题】下列关于天球坐标系与天体周日视运动说法正确的是（）
    B、每日天体的地平坐标与时角坐标随着天体向西的视运动,与时俱增
    C、地平坐标系的方位流失不均匀,时角坐标系的时角值流逝均匀
    D、地球不同经度地区,对应始圈不同,同一时刻天体在不同地区的地平坐标与时角坐标也不同

7、【多选题】下列关于天球坐标系与天体周年视运动说法正确的是（）
    B、恒星没有明显的周年视运动,太阳系天体有明显的周年视运动
    C、天体赤道坐标与黄道坐标表示的是从地球上观测天体在天球上的投影位置, 与地球自转无关,一天内的变化很小
    D、太阳系天体沿黄道的周年视运动会导致天体的黄经和赤经“与日俱增”

3.10小结及章节测验

50、【多选题】下列关于天体视运动说法正确的是（）
D、每天同一时刻月亮的位置逐日东移是天体周年视运动的表现

55、【多选题】下列关于天球坐标系与天体周日视运动说法正确的是（）
    B、每日天体的地平坐标与时角坐标随着天体向西的视运动,与时俱增
    C、地平坐标系的方位流失不均匀,时角坐标系的时角值流逝均匀
    D、地球不同经度地区,对应始圈不同,同一时刻天体在不同地区的地平坐标与时角坐标也不同

56、【多选题】下列关于天球坐标系与天体周年视运动说法正确的是（）
    B、恒星没有明显的周年视运动,太阳系天体有明显的周年视运动
    C、天体赤道坐标与黄道坐标表示的是从地球上观测天体在天球上的投影位置, 与地球自转无关,一天内的变化很小
    D、太阳系天体沿黄道的周年视运动会导致天体的黄经和赤经“与日俱增”

4、【单选题】下列关于折射望远镜说法不正确的是（）
B、折射望远镜的物镜和目镜是凸透镜和凸透镜的组合,也可能是凸透镜和凹透镜的组合,前者成正像,后者成倒像
C、折射望远镜的重量和造价随口径快速上升,世界最大的折射望远镜的口径约1.02m

8、【多选题】下列关于折反射望远镜的说法正确的是（）
    A、折反射望远镜相对于反射望远镜在反射镜的远端加装了改正透镜
    B、施卡式和马卡式等混合式望远镜的出现解决了典型折反射望远镜不能目视的问题
    C、马卡式采样的双面弯月形改正镜,制造工艺难度较大,不可制作大口径望远镜
    D、施卡式采用的单面波浪形改正镜,制造工艺难度较小,可用于制作大口径望远镜

2、【单选题】天文望远镜的极轴调整的主要目的是（）

4.12小结及章节测验

16、【单选题】下列关于折射望远镜说法不正确的是（）
B、折射望远镜的物镜和目镜是凸透镜和凸透镜的组合,也可能是凸透镜和凹透镜的组合,前者成正像,后者成倒像
C、折射望远镜的重量和造价随口径快速上升,世界最大的折射望远镜的口径约1.02m

22、【单选题】天文望远镜的极轴调整的主要目的是（）

45、【多选题】下列关于折反射望远镜的说法正确的是（）
    A、折反射望远镜相对于反射望远镜在反射镜的远端加装了改正透镜
    B、施卡式和马卡式等混合式望远镜的出现解决了典型折反射望远镜不能目视的问题
    C、马卡式采样的双面弯月形改正镜,制造工艺难度较大,不可制作大口径望远镜
    D、施卡式采用的单面波浪形改正镜,制造工艺难度较小,可用于制作大口径望远镜

5.17小结及章节测验

6.35.2 太阳系：天体分类

6.45.3 太阳系：运动演化

6.16小结及章节测验

3、【多选题】下列关于月球地质说法正确的是( )

7、【多选题】下列关于月球说法正确的是( )

16、【多选题】下列关于月球说法正确的是( )

5、【多选题】下列关于恒星视差与光行差说法正确的是()
A、恒星的周年视差通常导致恒星投影位置沿年视差椭圆的半径方向偏离平均位置
B、恒星的光行差通常导致恒星投影位置沿年视差椭圆的切向方向偏离平均位置

23、【多选题】下列关于恒星视差与光行差说法正确的是()
A、恒星的周年视差通常导致恒星投影位置沿年视差椭圆的半径方向偏离平均位置
B、恒星的光行差通常导致恒星投影位置沿年视差椭圆的切向方向偏离平均位置

12、【多选题】下列关于昼长与正午太阳高度的空间变化规律说法正确是( )
    A、昼长变化以赤道为中心,向两侧呈现翘翘板似的匀速增长与递减
    B、正午太阳高度变化以直射点为中心,向两侧呈现翘翘板似的加速增长与递减
    D、正午太阳高度以直射点为中心,向两侧呈现对称式匀速增长与递减

5、【多选题】地球现有轨道参数配置下( )
    A、黄赤夹角和偏心率导致热量在季节上的分配在北半球是抵消的
    B、黄赤夹角和偏心率导致热量在季节上的分配在北半球是叠加的
    C、黄赤夹角和偏心率导致热量在季节上的分配在南半球是抵消的
    D、黄赤夹角和偏心率导致热量在季节上的分配在南半球是叠加的

6、【多选题】下列关于地外行星天象说法正确的是( )
B、地外行星的大冲是其位于近日点附近,而地球处于远日点附近时
C、地外行星的小冲是其位于远日点附近,而地球处于近日点附近时

6、【多选题】下列关于日月食持续时间正确的是( )

4、【多选题】下列关于日月食限说法正确的是( )
B、月食限是地本影轮与日轮相切时,黄白交点到地本影轮的黄经差
D、月食限是地本影轮与月轮相切时,黄白交点到地本影轮的黄经差

3、【多选题】下列关于北半球夏半年天体视运动说法正确的是( )
    B、夜间黄道在赤道下,黄道上的黄道星座的赤纬为负,中天高度低,出没方位偏南
    C、夜间黄道在赤道下,黄道上的行星的赤纬为负,中天高度低,出没方位偏南
    D、夜间黄道在赤道下,黄道上的月球的赤纬为负,中天高度低,出没方位偏南

4、【多选题】下列关于北半球冬半年天体视运动说法正确的是( )
    B、夜间黄道在赤道上,黄道上的黄道星座的赤纬为负,中天高度低,出没方位偏南
    C、夜间黄道在赤道上,黄道上的行星的赤纬为负,中天高度低,出没方位偏南
    D、夜间黄道在赤道上,黄道上的月球的赤纬为负,中天高度低,出没方位偏南

9.22小结及章节测验

94、【多选题】下列关于昼长与正午太阳高度的空间变化规律说法正确是( )
    A、昼长变化以赤道为中心,向两侧呈现翘翘板似的匀速增长与递减
    B、正午太阳高度变化以直射点为中心,向两侧呈现翘翘板似的加速增长与递减
    D、正午太阳高度以直射点为中心,向两侧呈现对称式加速增长与递减

96、【多选题】地球现有轨道参数配置下( )
    A、黄赤夹角和偏心率导致热量在季节上的分配在北半球是抵消的
    B、黄赤夹角和偏心率导致热量在季节上的分配在北半球是叠加的
    C、黄赤夹角和偏心率导致热量在季节上的分配在南半球是抵消的
    D、黄赤夹角和偏心率导致热量在季节上的分配在南半球是叠加的

102、【多选题】下列关于地外行星天象说法正确的是( )
B、地外行星的大冲是其位于近日点附近,而地球处于远日点附近时
C、地外行星的小冲是其位于远日点附近,而地球处于近日点附近时

123、【多选题】下列关于日月食持续时间正确的是( )

126、【多选题】下列关于日月食限说法正确的是( )
B、月食限是地本影轮与日轮相切时,黄白交点到地本影轮的黄经差
D、月食限是地本影轮与月轮相切时,黄白交点到地本影轮的黄经差

136、【多选题】下列关于北半球夏半年天体视运动说法正确的是( )
    B、夜间黄道在赤道下,黄道上的黄道星座的赤纬为负,中天高度低,出没方位偏南
    C、白天黄道在赤道下,黄道上的太阳的赤纬为负,中天高度低,出没方位偏南
    D、夜间黄道在赤道上,黄道上的月球的赤纬为正,中天高度高,出没方位偏北

137、【多选题】下列关于北半球冬半年天体视运动说法正确的是( )
    B、夜间黄道在赤道上,黄道上的黄道星座的赤纬为正,中天高度高,出没方位偏北
    C、夜间黄道在赤道上,黄道上的行星的赤纬为正,中天高度高,出没方位偏北
    D、夜间黄道在赤道上,黄道上的月球的赤纬为正,中天高度高,出没方位偏北

10.10小结及章节测验

11.11小结及章节测验

10、【单选题】全天星空按照北半球春分、夏至、秋分以及冬至太阳在天球上的投影位置可依次划分为（）

114、【多选题】下列关于天球坐标系与天体周日视运动说法正确的是（）
    B、每日天体的地平坐标与时角坐标随着天体向西的视运动,与时俱增
    C、地平坐标系的方位流失不均匀,时角坐标系的时角值流逝均匀
    D、地球不同经度地区,对应始圈不同,同一时刻天体在不同地区的地平坐标与时角坐标也不同

115、【多选题】下列关于天球坐标系与天体周年视运动说法正确的是（）
    B、恒星没有明显的周年视运动,太阳系天体有明显的周年视运动
    C、天体赤道坐标与黄道坐标表示的是从地球上观测天体在天球上的投影位置, 与地球自转无关,一天内的变化很小
    D、太阳系天体沿黄道的周年视运动会导致天体的黄经和赤经“与日俱增”

139、【多选题】下列关于昼长与正午太阳高度的空间变化规律说法正确是( )
    A、昼长变化以赤道为中心,向两侧呈现翘翘板似的匀速增长与递减
    B、正午太阳高度变化以直射点为中心,向两侧呈现翘翘板似的加速增长与递减
    D、正午太阳高度以直射点为中心,向两侧呈现对称式加速增长与递减

}

摘要本文研究了酸性铬蓝K （ACBK）在pH为10.0的NH3 - NH4Cl介质中与钙和镁同时显色的条件以酸性铬蓝K作显色剂，Ca2+和Mg2+离子均可与ACBK形成1∶1的配合物，在468nm波长处，两种配合物存在一等摩尔吸收点，在此波长及最佳操作条件下，Ca2+和Mg2+的总含量在0～3×10-6 mol·L-1浓度范围内符合比耳定律。并研究了影响该显色反应的各种因素及一些常见共存离子的干扰行为，从而确定出用酸性铬蓝K作显色剂的分光光度法测定水的硬度的最佳实验条件。本法具有灵敏度和准确度较高、操作简便快速等优点，故适合于自来水厂和各化工厂对水的硬度测定。

关键词分光光度法;酸性铬蓝K;水硬度

水質硬度的大小对许多工业部门的生产都有很大的影响。为此，测定水的总硬度是许多工业部门的常规分析[1-2]。目前测定钙和镁总含量的方法通常用EDTA 络合滴定法[3]，这种方法灵敏度较低，且操作麻烦费时。已报道的分光光度法虽有较高的灵敏度，但大都是对水样中钙、镁离子的单一测定或分别测定，应用于水硬度的测定，达不到简便快速的要求。本文采用酸性铬蓝K （ACBK）与钙和镁同时作用的显色体系，应用于水硬度的测定，具有灵敏度高、操作简便快速之优点。

仪器：7230可见分光光度计（宜兴市精科光学仪器有限公司）、紫外可见分光光度计（SPECORD50 德国耶拿公司）、精密酸度计（pHS-3C型上海精密科学仪器有限公司）、电子天平（BS1108S北京赛多利斯天平有限公司）。

试剂：CaCO3（基准试剂天津市河北区海晶精细化工厂）;MgO（沈阳市试剂五厂）;酸性铬蓝K（指示剂北京化工厂）

分别取Ca2+、Mg2+标准溶液或等摩尔的Ca2+、Mg2+混合溶液适量于50mL容量瓶中，加5×10-4 mol·L-1酸性铬蓝K溶液2.00mL，pH=10.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液10mL，用水稀释至刻度，摇匀，静置5min后，用1cm比色皿于在波长468nm处以试剂空白为参比，测量吸光度。

按上述试验方法利用紫外扫描分别绘制了钙、镁有色配合物（浓度均为5×10-5mol·L-1）的吸收光谱，结果见图1。由图1可知，Ca-ACBK的最大吸收波长分别在510nm和540nm处，Mg-ACBK的最大吸收波长为511nm和543nm，而两种配合物光谱曲线的交点在468nm处，以下试验均采用468nm波长（即Ca、Mg的等摩尔吸收波长）进行。

在Ca2+、Mg2+等摩尔浓度混合溶液中，分别加入pH值不同的NH3-NH4Cl缓冲溶液（pH9.0～10.6）进行显色试验，发现吸光度随pH增大而增大，但在pH9.9～10.2范围内吸光度基本保持稳定，因此本实验选用pH=10.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液。

经试验，缓冲溶液用量在8.5mL以上时，有足够的缓冲能力将整个显色体系的pH值维持在10.0，本实验选10mL。

在Ca2+、Mg2+等摩尔浓度混合溶液六份，分别加入显色剂酸性铬蓝K用量在1.00，1.50，2.00，2.50，2.80，3.00mL的光度，以吸光度为纵坐标，显色剂用量为横坐标绘制曲线，找出吸光度最大且恒定的显色剂体积作为显色剂最佳用量。

3.5 共存离子的影响

将Ca2+与Mg2+离子等摩尔混合浓度（5×10-5 mol·L-1），分别取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL于25mL容量瓶中，按实验方法测定数据绘制标准曲线。结果表明，二者显色后在0～3×10-6 mol·L-1浓度范围内符合朗伯比耳定律，从而得出一元线性回归方程。

取Ca2+、Mg2+混合标准溶液显色浓度为5×10-4 mol·L-1的样液进行7 次平行测定，求得相对标准偏差为0.83%。对水样进行测定，并分别加入Ca2+、Mg2+混合标准溶液测定回收率。实验结果表明本方法具有较高灵敏度和准确度、操作简便快速等优点，故适合于自来水厂和各化工厂对水的硬度测定。

[1] 北京大学化学系分析化学教学组.基础分析化学实验（第二版）[M].北京：北京大学出版社，1998：176-179.

[2] 张孙玮，吴水生，刘绍璞.有机试剂在分析化学中的应用[M].北京：科学出版社，1981：204-207.

[3] 武汉大学主编.分析化学实验[M].北京：离等教育出版社，1994：142.

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