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pUC-T simple cloning kit
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3秒自动关闭窗口（6分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被b-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达b-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。右图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：（1）作为受体大肠杆菌应____，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理（目的是____）过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，并加入____。（2）图中的培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入____等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：①____。②____。-乐乐题库
& 基因工程、生物技术的安全性和伦理问题知识点 & “（6分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制...”习题详情
99位同学学习过此题，做题成功率78.7%
（6分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被b-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达b-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。右图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：（1）作为受体大肠杆菌应&&&&，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理（目的是&&&&）过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，并加入&&&&。（2）图中的培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入&&&&等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：①&&&&。②&&&&。（12分）（1）不含氨苄青霉素抗性基因（或对氨苄青霉素敏感） 增加细胞壁的通透性&在试管Ⅰ中制备好的DNA&
本题难度：一般
题型：解答题&|&来源：2012-浙江省富阳场口中学高三第一次月考生物试题
分析与解答
习题“（6分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会...”的分析与解答如下所示：
PUC118质粒携带了氨苄青霉素抗性基因 ，受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，才能才能在含有氨苄青霉素的培养基上筛选出导入重组质粒的受体大肠杆菌。用氯化钙溶液处理增加其细胞壁的通透性过的受体大肠杆菌呈感受态，能吸收试管中的DNA，筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌，质粒lacZ基因中插入了外源基因，带有PUC118质粒的大肠杆菌便不能表达β—半乳糖苷酶，培养基中的X—gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落，因此选择培养基中还应加入IPTG、X—gal，如果长出蓝色菌落，说明自连的运载体PUC118质粒已转入受体菌，但目的基因没有接入运载体或说明重组质粒没导入受体大肠杆菌；如果长出白色菌落，说明重组质料已导入受体大肠杆菌。
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（6分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-...
错误类型：
习题内容残缺不全
习题有文字标点错误
习题内容结构混乱
习题对应知识点不正确
分析解答残缺不全
分析解答有文字标点错误
分析解答结构混乱
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错误详情：
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经过分析，习题“（6分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会...”主要考察你对“基因工程、生物技术的安全性和伦理问题”
等考点的理解。
因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
基因工程、生物技术的安全性和伦理问题
与“（6分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会...”相似的题目：
细胞工程根据操作对象的不同，可分为植物细胞工程和动物细胞工程两大领域。近年来，细胞工程领域成果迭出，方兴未艾。请回答以下问题：（1）应用植物组织培养技术，可以实现植物种苗短时间内大量繁殖。植物组织培养技术所利用的生物学原理是&&&&。利用植物组织培养技术培育无病毒植株，选材时一般选取&&&&。（2）应用植物体细胞杂交技术，能够培育出靠杂交育种无法得到的作物新品种。在进行植物体细胞杂交之前，必需先用&&&&酶去除细胞壁，获得有活力的原生质体。进行原生质体融合时常用的化学促融剂是&&&&。（3）应用动物细胞培养技术可以大量培养各种抗病疫苗。在进行动物细胞培养之前，需先用&&&&酶处理组织切块，使其分散成单个细胞。进行动物细胞培养时，所需气体主要有&&&&。（4）应用杂交瘤细胞技术能为人类提供诊治肿瘤的单克隆抗体。制备单克隆抗体过程中，经选择培养得到的杂交瘤细胞还需进行&&&&和&&&&，经多次筛选可获得数量足够的能分泌所需抗体的细胞。与常规的抗体相比，单克隆抗体具有的显著的特点是&&&&；单克隆抗体通常与抗癌药物结合在一起构成&&&&，用于癌症的治疗。&&&&
随着生物技术的迅速发展，已灭绝生物的“复活”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚刚死亡,下列“复活”野驴的方法中，最可行的是&&&&将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体取出野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体取出野驴的体细胞核移植到家驴的去核卵母细胞中，经孕育培养成新个体将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体
下图表示利用胚胎干细胞(ES细胞)所作的一系列研究，则相关分析中错误的是&&&&过程Ⅰ将胚胎干细胞置于γ射线灭活的鼠胎儿成纤维细胞的饲养层上培养时，为满足干细胞增殖所需的营养物质，通常在培养层上还需添加动物血清过程Ⅱ将带有遗传标记的ES细胞注入囊胚腔，能正常发育成为胚胎，说明ES细胞具有全能性过程Ⅳ利用免疫缺陷的小鼠目的是受体不对移植的组织细胞产生免疫反应过程Ⅲ可利用显微注射法将目的基因“褐毛基因”直接导入ES细胞时
“（6分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制...”的最新评论
该知识点好题
该知识点易错题
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关于pUC载体，请教收藏
书上说多克隆位点密集了以后，都放到一个选择标记里，这样只要成功插入一个目标片段，标记就失活了，其他的有没有插入我们就无从得知了，它的解决方法是引入X-gal
很奇怪，这么密集的位点肯定不是天然限制位点，既然是人造的，在需要多个片段插得接近些，要组合使用的时候，我们就安排近些，需要远，就安排远些不就好了
再说了，如果几个基因是近距离才能互相调控的，那么必须挨到一起放，这样就是加入了X-gal也没用啊，还是那个问题，插一个，α片段就失活了，还是不能解决问题
我觉得α片段的引入顶多就是增加了一个遗传标记的选择而已，并不是所谓难题的解决办法
这么说对么，如果不对，请指正，如果对，什么方法可以解决那个问题呢
我觉得你描述很混乱。首先，pUC支持的只是插入一个片段，并不支持多个片段插入。需要指出的是，几乎所有克隆载体都是出插入一个片段。所以你说的“需要多个片段插得接近些，要组合使用的时候，我们就安排近些，需要远，就安排远些不就好了”是没有意义的。其次，载体只产生α片段，插入外源片段后就阻断了α片段的合成，因而不产生半乳糖苷酶活性。最后，插入的片段位置是酶切位点决定的。如果采用MCS上的酶切位点，那么外源片段插入的位置是确定的，并不存在“其他的有没有插入我们就无从得知了”这个问题。而且，你这个“其他的”指的什么？
如果每个载体只能插入一个片段，那所有的问题就都没有了
其他的指的是其他的片段
我所有的问题是针对多个插入片段的插入情况的判断方法来说的
可是我觉得很奇怪，书上的表达给人一种可以插入很多片段的感觉
不知道风飞雪有没有《分子克隆》这本书，你想办法搞到看看，就在最前几页，您去读读，看看他的表达那里有问题，还是我哪里理解错了，真的让人感觉可以插很多片段的！
我的想法见
我也认同3楼的发言。
你说的是构建融合载体。就是把不同的片段拼接起来，然后一并转入最终的载体。比如我想给克隆出的一个基因加上35S启动子并在C端加上His标记，然后最终在pET载体中表达，那么我需要先在pUC的MCS上依次插入35S启动子、A基因、GFP，这三个组分一定是紧挨着并且处于同一阅读框中才行。这三者整个作为一个片段在pUC载体中存在，然后酶切连接在pET载体上。我想说的是，在pUC载体上，有效的插入位点只是在MCS上，其他位点的插入是无效的、无法检测的。
hy小朋友，我在实验室重要的工作就是构建载体作为工具使用，请不要随意怀疑别人在这方面的经验。
抱歉啦~不该怀疑您的。。。
我明白了谢谢二位
我不是小朋友啦=&=
回复：3楼有没有构建载体入门知识，推荐给我吧，我今天在看质粒图谱看得偶好晕哪！
回复：10楼构载体不需要什么入门知识吧...只要会做酶切连接、会养菌就行了啊。最多再加上点基本的分子生物学常识。
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pUC18质粒载体与pUC19质粒载体除了多克隆位点（Multiple Clone Site）部分反向互补外，其它部分完全一样。pUC19质粒载体图谱pUC18、pUC19载体适合于DNA片段的克隆、进行DNA测序、对外源基因进行表达等。由于在lacZ领域中含有多克隆位点，因此在以lacZ缺欠细胞作为宿主 (如：JM109等) 进行转化后，在含有IPTG、X-Gal 的平板培养基上进行培养时，可以很容易地通过蓝白筛选，判断载体中有无DNA片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因，对插入载体中的DNA片段进行测序等。进行DNA测序时，可以方便地使用M13系列的[1]。2686 bp（1）外源基因。
（2）利用lac promoter进行基因表达。
（3）使用M13 Primers进行DNA测序。Entry Name
Accession No.
SYNPUC18CV
SYNPUC19CV
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